Vol.44，No.5 (2016)

表題：

微生物試験迅速化技術の現状と展望[6] PCRによる選択的検出法を用いた迅速検出

著者：

吉崎美和（タカラバイオ（株））

掲載：

日本防菌防黴学会誌，Vol.44，No.5，pp.241−246（2016）

EMA-PCR法は，PCRの迅速性に生菌選択性のメリットが加わった画期的な手法であり，細菌検査のみならず，殺菌効果の検証や腸内細菌の生存率の確認等，さまざまな場面での活用が模索されている。本項では，EMA-PCR法とその進化型であるLC EMA-qPCR法を紹介する。EMA（ethidium monoazide）は核酸に結合するインターカレーターの一種であり，光照射により核酸に共有結合する。EMA-PCR法は，EMAのこのような性質を利用して，生菌由来DNAをPCRで選択的に検出する手法である。操作法は従来のPCR法と同様で比較的容易であるが，菌種や検体の性状，PCR増幅サイズ等，様々な要因を考慮してEMA処理条件を最適化する必要がある。LC EMA-qPCR法は，レジオネラ属菌の検出法として開発され，液体培養による生菌の増殖とEMA処理による死菌由来の検出抑制を組み合わせることにより，より確実な生菌選択的検出を可能とした手法である。浴槽水176検体を用いて，従来の平板培養法とLC EMA-qPCR法によるレジオネラ属菌検出結果を比較したところ，感度89.5％，特異度73.9％で高い相関性を示す結果が得られており，培養検査前の迅速なスクリーニング検査法としての活用が期待されている。

Key words：

EMA-PCR法/レジオネラ属菌/生菌迅速検査/LC EMA-qPCR法．